Contributor:

Zabłocka, Barbara (Promotor)

Publisher:

Medical Research Center Polish Academy of Sciences

Place of publishing:

Warszawa

Description:

Bibliogr. zawiera 100 pozycji ; 86 s.: wykr., fotogr. ; 30 cm

Degree name:

doctor

Level of degree:

2

Degree discipline :

medical biology

Degree grantor:

Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN

Abstract:

Choroba Charcot-Marie-Tooth typu 2A (CMT2A) stanowi najczęstszą postać polineuropatii uwarunkowanej genetycznie , w której dochodzi do uszkodzenia aksonów nerwów obwodowych. Za jej przyczynę uznaje się mutacje w genie mitofuzyny 2 (Mfn 2), kodującym białko zlokalizowane w zewnętrznej błonie mitochondrialnej. Mfn2 wraz z mitofuzyną 1 (Mfn1) uczestniczą w fuzji mitochondriów. Wobec występowania licznych odmian polimerycznych genu Mfn2 oraz szerokiej różnorodności fenotypowej wśrod chorych diagnostyka oparta na badaniach neurologicznych i genetycznych nie zawsze jest wystarczająca do postawienia pełnej diagnozy. Dlatego też w niniejszym projekcie podjeto próbe stworzenia testu patogenności mutacji w oparciu o śledzenie skutków na poziomie komórki. W tym celu podjęto następujące kroki : 1. W celu wyboru parametru do testu przeprowadzono charakterystykę porównawczą trzech typów Mysich Embrionalnych Fibroblastów o różnej ekspresji Mfn1 i Mfn2 . Ocenie podano m. in. parametry bioenergetyczne (oddychanie komórki, biosynteza ATP i mleczanu , produkcja ROS), jak i obecność wybranych białek mitochondrialnych oraz procesów związanych z ilością i biogenezą mitochondriów. W oparciu o wyniki tych badań zdecydowano, że ocena stosunku mitochondrialnego i jądrowego DNA ( mtDNA /nDNA) będzie wyorzystana w dalszych etapach poszukiwania testu. Jednocześnie (2) na podstawie oceny ekspresji genów i immunoraktywności białka mitofuzyny 1 i 2 u myszy pozytywnie zweryfikowano hoptezę o stosunkowo niskiej ekspresji Mfn 1 w nerwach obwodowych.Na tej podstawie zadecydowano, że ocena skutków mutacji w genie Mfn 2 powinna być prowadzona podczas nieobecnośći Mfn 1. Następnie w oparciu o powyższe wyniki (3) zmierzonono stosunek mtDNA/ nDNA w komórkach MEF z delecją genów Mfn1 i Mfn2 po nadekspresji prawidłowego genu Mfn2 oraz mutacją znalezioną u polskich chorych z CMT2A. Nadekspresja genu z mutacją punktową (R94Q oraz R250W) powodowała wzrost stosunku mtDNA/nDNA , jenak nie znaczący , jak w przypadku nadekspresji prawidłowgo genu Mfn2 . Natomiast mutacja R400X nie zmiemieniała tego stosunku. Na tej podstawie wnoskuje się, że stosunek mtDNA/nDNA może być wykorzystany do oceny patogenności mutacji w genie Mfn2 pomocniczooraz dalsze badania nad testem patogenności w oparciu o zmiany ilości mtDNA są potrzebne.

Detailed Resource Type:

Praca doktorska

Format:

application/pdf

Resource Identifier:

oai:rcin.org.pl:58997

Source:

IMDiK PAN, call no. ZS 366 ; click here to follow the link

Language:

pol

Digitizing institution:

Mossakowski Medical Research Institute PAS

Original in:

Library of the Mossakowski Medical Research Institute PAS

Projects co-financed by:

European Union. European Regional Development Fund

Access:

Open