Institutional creator:

Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. Mirosława Mossakowskiego PAN

Contributor:

Zielińska, Magdalena (Promotor)

Place of publishing:

Warszawa

Description:

Cykl 4 publikacji; 173 s.: il., wykr., tabl.; 30 cm. ; Bibliografia zawiera 112 pozycji.

Degree name:

doktor

Level of degree:

2

Degree discipline :

nauki medyczne

Degree grantor:

Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN

Type of object:

Praca dyplomowa

Abstract:

Encefalopatia wątrobowa (ang. hepatic encephalopathy; HE) ujawniająca się w wyniku uszkodzeń wątroby stanowi istotny problem epidemiologiczno - ekonomiczny, który dotyczy ~1 miliona mieszkańców krajów UE. Najpoważniejszym objawem klinicznym jest obrzęk mózgu prowadzący w większości przypadków ostrej i w stanach zaostrzenia przewlekłej HE, do zgonu pacjenta. Mechanizm obrzęku mózgu w HE jest głównie następstwem obrzmienia astrocytów, jednak udział czynnika naczyniowego, związanego z dysfunkcją bariery krew mózg (ang. blood - brain barrier; BBB) wydaje się mieć również istotne znaczenie. Biorąc pod uwagę liczbę współgrających elementów, wiedza dotycząca uszkodzenia i deregulacji składowych BBB wymaga uszczegółowienia. W przebiegu procesów patologicznych coraz częściej zwraca się uwagę na udział jednoniciowych, niekodujących RNA - mikroRNA (ang. microRNA; miRNA), postawiono więc hipotezę zakładającą, że jedną z przyczyn uszkodzenia BBB w HE są zmiany profilu miRNA. Celem dysertacji była analiza profilu miRNA w osoczu i korze mózgowej szczurów z hiperamonemią prostą i szczurów z ostrym uszkodzeniem wątroby oraz wykazanie molekularnego podłoża zmian w komórkach śródbłonka naczyniowego mózgu, głównego elementu tworzącego BBB. Doświadczenia wykonano wykorzystując (1) modele in vivo tj. szczurzy model hiperamonemii i szczurzy model ostrego uszkodzenia wątroby (2) modele in vitro tj. linię komórek śródbłonka naczyń mózgu szczura (ang. rat brain endothelial cell line; RBE4) i pierwotne hodowle komórek śródbłonka naczyń mózgu szczura (ang. primary brain microvascular endothelial cells; PBMEC), oraz (3) izolowane naczynia mózgu szczura. Na podstawie analizy profilu miRNA osocza i kory mózgowej szczurów modelowych, zidentyfikowano odpowiednio w modelu hiperamonemii prostej 35 i 338, a w modelu ostrego uszkodzenia wątroby 128 i 345 zmienionych miRNA, zaś analiza bioinformatyczna, wykorzystująca dostępne narzędzia oraz bazy danych wykazała potencjalny związek 2 miRNA z genami kodującymi białka związane strukturalnie i funkcjonalnie z BBB (okludynę, integrynę 1β). W ocenie morfologicznej BBB wykazano uszkodzenia obejmujące zmiany morfologii komórek śródbłonka, korelujące ze zwiększoną przepuszczalnością BBB. W badaniach in vitro, w komórkach śródbłonka naczyń mózgowych, analizowano zmiany poziomu ekspresji badanych białek, ze wskazaniem ich znaczenia funkcjonalnego, wykazując udział zidentyfikowanych miRNA-122-5p i miRNA-183-5p w obniżeniu poziomu ekspresji odpowiednio: okludyny i integryny 1β. Oceniona w modelu OA zmniejszona gęstość naczyń mózgowych sugerowała zmienione unaczynienie mózgu, porównywalne z unaczynieniem mózgu szczurów 12 miesięcznych, sugerując zmiany charakteryzujące starzenie normatywne. Zmieniony fenotyp komórek śródbłonka zweryfikowano w badaniach in vitro, wykazując cechy charakterystyczne dla procesu starzenia. 9 Skonstruowano, wykonano i przetestowano autorski system do pomiaru wartości rezystancji elektrycznej, służący ocenie integralności komórkowych modeli BBB w czasie rzeczywistym. Wartości pomiarów uzyskane w testach komórkowych były niezależne od zmian pH i temperatury, cechowały się wyższą dokładnością i precyzją, dlatego urządzenie wydaje się być odpowiednim narzędziem do badań toksyczności związków / leków w ocenie funkcji barier biologicznych. Podsumowując, wyniki dysertacji poszerzają wiedzę na temat patomechanizmu uszkodzeń BBB w HE, w szczególności komórek śródbłonka. W kontekście dysfunkcji wątroby, badania wskazują na znaczenie miRNA w komunikacji na osi wątroba-mózg. Wyniki badań dostarczają nowych danych na temat roli miRNA w regulacji funkcji BBB, co może mieć potencjalne zastosowanie w diagnostyce i terapii zaburzeń neurologicznych związanych z chorobami wątroby. Konstrukcja autorskiego systemu do pomiaru rezystancji warstwy komórek, stanowi wartość interdyscyplinarną dysertacji.

Detailed Resource Type:

Praca doktorska

Resource Identifier:

oai:rcin.org.pl:242671

Source:

IMDiK PAN, sygn. ZS 439 ; click here to follow the link

Language:

pol

Language of abstract:

eng

Rights:

Licencja Creative Commons Uznanie autorstwa 4.0

Terms of use:

Zasób chroniony prawem autorskim. [CC BY 4.0 Międzynarodowe] Korzystanie dozwolone zgodnie z licencją Creative Commons Uznanie autorstwa 4.0, której pełne postanowienia dostępne są pod adresem: ; -

Digitizing institution:

Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego Polskiej Akademii Nauk

Original in:

Biblioteka Instytutu Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN

Access:

Otwarty