Contributor:

Sypecka, Joanna (Promotor) ; Ziemka-Nałęcz, Małgorzata (Promotor pomocniczy)

Publisher:

Instytut Medycyny Doswiadczalnej i Klinicznej im. Miroslawa Mossakowskiego PAN

Place of publishing:

Warszawa

Description:

Bibliografia zawiera 225 pozycje ; 113s.: il., wykr., tabl., fotogr.; 30 cm.

Degree name:

doktor

Level of degree:

2

Degree discipline :

nauki medyczne

Degree grantor:

Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN

Abstract:

Asfiksja okołoporodowa (neonatalna hipoksja-ischemia, HI) związana jest z nieprawidłowym przepływem krwi oraz zaburzoną wymianą gazową w okresie okołoporodowym. Wysoka śmiertelność lub niepełnosprawność motoryczna i poznawcza sprawiają, że powikłania po HI stanowią istotny problem społeczny. W krajach rozwiniętych problem ten dotyczy 1-8 na 1000 żywych urodzeń. Obecnie jedyną stosowaną terapią jest hipotermia terapeutyczna. Pomimo wielokierunkowych badań nadal brak jest skutecznej strategii neuroprotekcyjnej i neuroregeneracyjnej. Wzajemne zależności między komórkami glejowymi w rozwijającym się mózgu po wystąpieniu okresowego niedoboru glukozy i tlenu są słabo poznane. Wśród komórek glejowych wyróżnia się makroglej, w tym astrocyty i oligodendrocyty (OL) oraz mikroglej. Komórki glejowe zaangażowane są w prawidłowy rozwój i funkcjonowanie układu nerwowego, w utrzymanie homeostazy w mikrośrodowisku tkankowym oraz w odpowiedzi immunologicznej. Aktywowane komórki glejowe produkują czynniki immunomodulujące, w tym cytokiny (prozapalne lub przeciwzapalne). Wzajemne oddziaływanie komórek może mieć decydujący wpływ na przewagę procesów neuronaprawczych nad zapalnymi i neurodegeneracyjnymi.Celem niniejszej pracy jest analiza wpływu okresowego niedoboru tlenu i glukozy (model HI in vitro) na przeżywalność, proliferację, fenotyp i morfologię neonatalnych szczurzych komórek glejowych oraz analiza ich profilu sekrecyjnego. W celu jak najlepszego naśladowania warunków panujących w tkance nerwowej, zastosowano normoksję fizjologiczną (5 % stężenie tlenu), a także przetestowano wybrane związki biomimetyczne (laminina, fibronektyna, ECM Gel) do pokrywania powierzchni hodowlanych. Aby ocenić rolę wybranych czynników (czynników troficznych, cytokin i ich receptorów) zaangażowanych w oddziaływania między komórkami glejowymi, zastosowano pożywki hodowlane o restrykcyjnym składzie. Badania przeprowadzano na komórkach glejowych pochodzących z mózgów osesków szczura (24-48h postpartum) obu płci stada Wistar. Z wyizolowanych półkul mózgu zakładano mieszaną glejową hodowlę pierwotną. Po 11-12 dniach hodowli in vitro, wyodrębniano poszczególne frakcje glejowe poprzez sekwencyjne wytrząsanie. Badania prowadzono na populacjach komórkowych hodowanych jako monofrakcje oraz ich współhodowlach. W wybranych punktach czasowych zbierano pożywki hodowlane, w których oceniano ilościowo stężenie wybranych czynników aktywnych (ELISA, Luminex).Analiza sekretomu komórek glejowych wykazała, że głównym źródłem IGF-1 są astrocyty. W przypadku kilku z badanych czynników wykazano znamienny modulujący wpływ parakrynnych oddziaływań międzykomórkowych na ich wydzielanie do pożywki hodowlanej, mi.in. w przypadku czynnika BDNF, którego poziom we współhodowlach OL i astrocytów jest znacznie niższy niż poziom sekrecji przez wymienione frakcje komórkowe hodowane oddzielnie. Podobny wpływ współhodowli zaobserwowano w przypadku wydzielania chemokiny CXCL1 przez OL i mikroglej, gdzie we wszystkich wariantach doświadczalnych odnotowano znamienny wpływ mikrogleju na wydzielanie wymienionej chemokiny przez OL. W przypadku receptorów CXCR2 i CXCR4, znamienny wpływ oddziaływań międzykomórkowych zaobserwowano natomiast we współhodowlach OL i astrocytów. Podsumowując, przeprowadzone badania mają nowatorski charakter w kontekście opracowania wydajnej metody pozyskiwania i hodowli w warunkach normoksji fizjologicznej wszystkich trzech głównych typów neonatalnych szczurzych komórek glejowych. Zastosowanie pożywek o restrykcyjnym składzie, wykluczających obecność czynników mogących wpływać modulująco na badane procesy, umożliwia wykorzystanie hodowli do modelowania in vitro wybranych okołoporodowych stanów patofizjologicznych. W przeprowadzonych badaniach, opisany system hodowli został wykorzystany do modelowania in vitro neonatalnej HI i badania oddziaływań miedzy komórkami glejowymi na sekrecję wybranych czynników aktywnych.

Detailed Resource Type:

Praca doktorska

Resource Identifier:

oai:rcin.org.pl:239192

Source:

IMDiK PAN, sygn. ZS 426 ; click here to follow the link

Language:

pol

Rights:

Licencja Creative Commons Uznanie autorstwa 4.0

Terms of use:

- ; Zasób chroniony prawem autorskim. [CC BY 4.0 Międzynarodowe] Korzystanie dozwolone zgodnie z licencją Creative Commons Uznanie autorstwa 4.0, której pełne postanowienia dostępne są pod adresem:

Digitizing institution:

Instytut Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego Polskiej Akademii Nauk

Original in:

Biblioteka Instytutu Medycyny Doświadczalnej i Klinicznej im. M. Mossakowskiego PAN

Access:

Otwarty