@misc{Rotko_Daria_New_2022,
 author={Rotko, Daria},
 editor={Szewczyk, Adam (1960- ) : Promotor},
 editor={Kunz, Wolfram S. : Promotor},
 editor={Kulawiak, Bogusz : Promotor pomocniczy},
 address={Warsaw},
 howpublished={online},
 year={2022},
 school={Instytut Biologii Doświadczalnej im. Marcelego Nenckiego PAN},
 publisher={Nencki Institute of Experimental Biology PAS},
 language={eng},
 abstract={Podstawowa właściwość mitochondriów – generowanie potencjału w poprzek wewnętrznej błony mitochondrialnej – łączy funkcje metaboliczne i sygnalizacyjne tej organelli. Mitochondrialne kanały potasowe o dużym przewodnictwie aktywowane jonami wapnia (mitoBK) dzięki precyzyjnej regulacji ich aktywności umożliwiają kontrolowany napływ jonów K+ do macierzy mitochondrialnej. Dzięki unikatowym mechanizmom regulacyjnym aktywacja kanału mitoBK indukuje mechanizmy cytoprotekcyjne w uszkodzeniu niedokrwienno-reperfuzyjnym. Funkcjonalne i strukturalne oddziaływanie kanałów mitoBK z łańcuchem transportu elektronów, a w szczególności z jego terminalnym enzymem oksydazą cytochromu c (COX), może być elementem mechanizmu cytoprotekcyjnego.Do zbadania interakcji między kanałami mitoBK oraz COX wykorzystano różne modele komórkowe z obniżonym poziomem tego enzymu. W ludzkich komórkach gwiaździaka indukowano obniżenie liczby kopii mitochondrialnego DNA (mtDNA) przez traktowanie 2',3'-dideoksycytydyną. Porównanie kompleksów białkowych tworzonych przez mitoBK i COX w komórkach gwiaździaka z obniżoną iością mtDNA i w komórkach dzikiego typu wskazało na możliwe oddziaływanie podjednostki tworzącej por kanału z kompleksami i respirasomami zawierającymi COX. Ponadto, w przypadku niedoboru COX indukowanego obniżeniem ilości mtDNA wystąpił spadek poziomu podjednostki α kanału mitoBK. Efekt ten był widoczny zarówno na poziomie białka, jak i mRNA. Analiza szlaków sygnałowych indukowanych przez deplecję mtDNA w komórkach gwiaździaka pozbawionych mtDNA wykazała aktywację zintegrowanej sygnalizacji odpowiedzi na stres.Ludzkie fibroblasty skórne z mutacją w podjednostce strukturalnej COX – COX8A – zostały wykorzystane jako kolejny model komórkowy z niedoborem COX. W fibroblastach z niedoborem COX8A i komórkach HEK293T z mutacjami wywołanymi CRISPR/Cas9 w genie kodującym COX8A scharakteryzowano organizację mitochondrialnego łańcucha oddechowego. Uzyskane wyniki wskazały, że kompleks IV w uzyskanych mutantach był obecny w respirasomach. Ponadto, zaobserwowano zmniejszenie ilości białka podjednostki tworzącej pory mitoBK oraz jej kompleksów białkowych.Aby prześledzić ogólnokomórkowe implikacje sprzężenia między łańcuchem oddechowym, w tym COX, a kanałem mitoBK, przeprowadzono doświadczenia elektrofizjologiczne. W badaniach z wykorzystaniem techniki patch-clamp oceniono wpływ gazowego przekaźnika tlenku węgla (CO), przypuszczalnie oddziałującego zarówno z COX, jak i mitoBK. O ilebezpośrednie zastosowanie roztworu nasyconego CO nie spowodowało znaczącej modulacji aktywności kanałów mitoBK, o tyle zastosowanie związków uwalniających CO wywoływało efekty plejotropowe. Zastosowanie hemu i heminy hamowało aktywność kanałów mitoBK. Wykazano, że zastosowanie roztworu nasyconego CO reaktywowało aktywność kanału zahamowanego cząsteczkami hemu},
 type={Tekst},
 title={New insights into the modulation of the mitochondrial large-conductance calcium-activated potassium channel : interaction with cytochrome c oxidase and carbon monoxide : PhD thesis},
 URL={http://rcin.org.pl./Content/236269/PhD%20thesis%20Daria%20Rotko%20FINAL.pdf},
 keywords={Donory tlenku węgla, Kanały BK, Kanały potasowe, Mitochondria, Oksydaza cytochromu c, Tlenek węgla},
}